Studies of mycorrhizal associations in Cistaceae from a maritime pine forest: ecological and biotechnological approach

Abstract

Este trabalho foi desenvolvido em três capítulos com três diferentes, mas complementares, âmbitos de trabalho: crescimento fúngico, estudo de associações micorrízicas em campo e síntese de micorrizas. No primeiro capítulo descrevemos o estabelecimento de culturas de micélio de quatro fungos, duas espécies micorrízicas (Lactarius deliciosus e Tricholoma portentosum) e duas espécies saprófitas (Agaricus bisporus e Macrolepiota procera), e o seu crescimento em cinco meios (Potato dextrose agar (PDA), Malt extract agar number 2 (MEA), Murishage and Skoog medium (MS), Biotin-Aneurin-Folic acid medium (BAF) e Melin-Norkrans Modified medium (MNM)) a três temperaturas diferentes (4ºC, 24ºC e 30ºC). Os resultados mostram que L. deliciosus cresce melhor em MNM ou MS a 24ºC e que os melhores meios para manutenção de culturas a 4ºC são PDA ou MNM, T. portentosum apresenta melhor crescimento em MNM ou PDA a 24ºC e para manutenção os melhores meios são BAF ou MNM. Quanto aos saprófitas, A. bisporus mostra melhor crescimento em PDA ou BAF a 24ºC com os mesmos meios sendo os melhores para manutenção e para M. procera o melhor crescimento foi detetado em PDA a 30ºC e para manutenção os melhores meio são BAF ou MS. O estudo de associações micorrízicas foi realizado numa floresta de pinheiro bravo na costa Portuguesa, as espécies vegetais estudadas foram Halimium halimifolium, Acacia longifolia e Pinus pinaster. Foi possível identificar seis espécies fúngicas associadas com H. halimifolium, uma associada a A. longifolia e seis associadas a P. pinaster, uma espécie foi encontrada em todos os hospedeiros e três espécies partilhadas entre H. halimifolium e P. pinaster. No último capítulo, foi descrita uma nova metodologia para a síntese de micorrizas, usando o meio MS como substrato. A síntese foi testada entre duas espécies vegetais da família Cistaceae, Halimium halimifolium e Tuberaria lignosa, e três espécies fúngicas de importância económica, Lactarius deliciosus, Tricholoma equestre e Tricholoma portentosum. Apenas o ensaio de síntese entre Tuberaria lignosa e Tricholoma equestre não produziu ectomicorrízas, provavelmente devido a contaminações.

This work was developed in three chapters with three different, but complemental, work scopes: fungal growth, study of mycorrhizal associations and mycorrhizal synthesis. In the first chapter we described the establishment of mycelial cultures of four fungi, two mycorrhizal species (Lactarius deliciosus and Tricholoma portentosum) and two saprophytic species (Agaricus bisporus and Macrolepiota procera) and their growth behaviours in five media (Potato dextrose agar (PDA), Malt extract agar number 2 (MEA), Murishage and Skoog medium (MS), Biotin-Aneurin-Folic acid medium (BAF) and Melin-Norkrans Modified medium (MNM)) at three different temperatures (4ºC, 24ºC e 30ºC). Our results showed that L. deliciosus grows best in MNM or MS at 24ºC and that the best media for culture maintenance at 4ºC are PDA or MNM, T. portentosum showed the best growth in MNM or PDA at 24ºC, for maintenance the best media are BAF or MNM. For the saprophytes, A. bisporus had the best growth in PDA or BAF at 24ºC with the same media being the best for maintenance and for M. procera the best growth was in PDA at 30ºC and for maintenance the best media are BAF or MS. The study of mycorrhizal associations was performed in a maritime pine forest in the Portuguese coast, the plant species studied were Halimium halimifolium, Acacia longifolia e Pinus pinaster. We found six fungal species associated with H. halimifolium, one associated with A. longifolia and six associated with P. pinaster, one species was found associated with all hosts and three species shared between H. halimifolium e P. pinaster. In the last chapter, we describe a new methodology for mycorrhizal synthesis, using MS medium as substrate. The synthesis was tested between two Cistaceae, Halimium halimifolium and Tuberaria lignosa, and three fungal species of economic importance, Lactarius deliciosus, Tricholoma equestre and Tricholoma portentosum. Only the assay between Tuberaria lignosa and Tricholoma equestre didn’t produce ectomycorrhizas, probably due to contamination.