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https://hdl.handle.net/10316/31230
Title: | Betacellulin and Neurogenesis in the Adult Central Nervous System | Authors: | Santos, Inês da Costa | Orientador: | Lovell-Badge, Robin Duarte, Carlos |
Keywords: | Neurogénese adulta; ZSV; Betacelulina; SeeDB; Clarity; CRISPR/CAS 9 | Issue Date: | 2015 | Citation: | SANTOS, Inês da Costa Santos - Betacellulin and neurogenesis in the adult central nervous system. Coimbra : [s.n.], 2015. Dissertação de mestrado em Biologia Celular e Molecular | Place of publication or event: | Coimbra | Abstract: | Neural
stem
cells
(NSCs)
reside
in
special
niches
in
the
adult
brain,
including
subventricular
zone
(SVZ)
of
the
lateral
ventricle
and
subgranular
zone
(SGZ)
of
the
dentate
gyrus.
Blood
vessels
are
an
important
coumpound
of
the
neurogenic
niches
as
they
secreate
proteins
such
as
betacellulin
(BTC)
that
stimulate
NSC
proliferation,
self-‐ renewal
and
differentiation.
BTC
is
a
member
of
the
epidermal
growth
factor
(EGF)
family
of
ligands,
and
has
been
widely
studied
in
many
different
contexts.
Recently,
it
has
been
demonstrated
that,
in
vitro,
BTC
can
induce
NSC
proliferation,
promote
self-‐renewal
and
prevent
spontaneous
differentiation.
In
vivo,
BTC
can
also
promote
neurogenesis.
BTC
is
released
into
the
neurogenic
niche
by
endothelial
cells
of
the
microvasculature
and
by
the
choroid
plexus
(CP).
It
is
thought
that
BTC
activity
in
NSCs
is
mediated
through
ErbB1
and
ErbB4
receptors
whose
activation
stimulate
the
AKT
and
MEK
signalling
pathways.
In
my
thesis
I
carried
out
analysis
understanding
the
influence
of
BTC
and
other
growth
factors
on
NSCs
in
vitro
using
the
neurosphere
assay
and
measuring
neurospheres
number
and
size.
I
also
studied
the
importance
of
AKT
and
MEK
signalling
pathways
in
NSCs
cultivated
in
medium
supplemented
with
different
growth
factors
including
BTC.
I
observed
an
increase
in
cell
cycle
arrest
when
inhibitors
of
both
signalling
pathways
were
added
together
in
all
culture
conditions.
Studies
to
better
characterize
the
interaction
between
neurogenic
niche
and
BTC
were
also
carried
out
using
newly
developed
visualisation
techniques,
SeeDB
and
CLARITY
that
allowed
us
to
have
a
3D
perspective.
In
parallel,
I
made
BTC
conditional
and
BTC
reporter
contructs
for
generating
mice
using
newly
developed
CRISPR/
Cas
9
technique.
These
mice
will
allow
us
to
better
understand parallel,
I
made
BTC
conditional
and
BTC
reporter
contructs
for
generating
mice
using
newly
developed
CRISPR/
Cas
9
technique.
These
mice
will
allow
us
to
better
understand
the relative importance of BTC in adult NSCs and whether BTC transcription is modulated
As células estaminais neuronais estão localizadas em nichos celulares especializados no cérebro adulto, incluindo a zona subventricular (ZSV) no ventrículo lateral e a zona subgranular (ZSG) no giro denteado. Os vasos sanguíneos são um componente importante dos nichos neurogenicos pois eles secretam proteínas como é o caso da betacelulina (BTC) que estimula a proliferação, auto-‐renovação, e diferenciação das células estaminais neuronais. A BTC é um membro da família de ligandos do factor de crescimento epidermal, e tem sido amplamente estudada em muitos contextos diferentes. Recentemente, foi demonstrado que, a BTC induz a proliferação, promove a auto-‐ renovação e previne a diferenciação espontânea das células estaminais neuronais, in vitro. In vivo, a BTC também promove a neurogénese. A BTC é libertada no nicho neurogénico pelas células endoteliais da microvasculatura e pelo plexo coróide. Pensa-‐se que a atividade da BTC nas células estaminais neuronais é mediada pelos receptores ErbB1 e ErbB4, cuja ativação estimula as vias de sinalização AKT e MEK. Na minha tese, procedi a análises por forma a perceber a influência da BTC e outros factores de crescimento nas células estaminais neuronais, in vitro, usando para isso o ensaio de neuroesferas bem como medindo o diâmetro e contando o número de neuroesferas. Também estudei a importância das vias de sinalização AKT e MEK nas células estaminais neuronais postas em cultura em meio suplementado com diferentes factores de crescimento incluindo a BTC. Em todas as condições de cultura, eu observei um aumento da paragem do ciclo celular quando foram adicionados os inibidores de ambas as vias de sinalização em conjunto. Foram também levados a cabo estudos para melhor perceber a interação entre o nicho neurogénico e a BTC usando para isso novas técnicas de visualização , como é o caso do SeeDB e do CLARITY que nos permitiu ter uma perspectiva 3D dessa mesma interação. Em paralelo, eu criei construções para gerar ratos condicionais e ratos repórter, usando a nova técnica CRISPR/Cas 9. Estes ratos irão permitir-‐nos melhor perceber a importância relativa da BTC nas células estaminais adultas e também perceber onde a transcrição da BTC é modulada |
Description: | Dissertação de mestrado em Biologia Celular e Molecular, apresentada ao Departamento de Ciências da Vida da Faculdade de Ciências e Tecnologia da Universidade de Coimbra | URI: | https://hdl.handle.net/10316/31230 | Rights: | openAccess |
Appears in Collections: | UC - Dissertações de Mestrado FCTUC Ciências da Vida - Teses de Mestrado |
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