Terapia Fotodinâmica: Uma Abordagem no Retinoblastoma

Abstract

A terapia fotodinâmica apresenta-se como uma abordagem terapêutica emergente no tratamento de cancro, podendo induzir morte celular através de um mecanismo que envolva stresse oxidativo por ativação luminosa de moléculas fotossensibilizadoras. Esta dissertação permitiu avaliar a ação fotodinâmica dos fotossensibilizadores BBr2HPP, BBr2HPC, BBr2HPP-O(CH2)2OH e BBr2HPPGluc-OAC em retinoblastoma humano in vitro. Os estudos de captação não demonstraram diferenças de captação entre os diferentes fotossensibilizadores. Os estudos de proliferação celular demonstraram que os quatro fotossensibilizadores têm efeitos semelhantes, apresentando valores de IC50 dentro da mesma ordem de grandeza. Foi também verificado que o tratamento fotodinâmico induz um decréscimo do conteúdo proteico na linha celular de retinoblastoma, compatível com diminuição da viabilidade celular. A morte celular ocorre preferencialmente por apoptose, corroborada pelo surgimento de um pico pré-G1, na análise do ciclo celular e paragem na fase G2/M. Neste trabalho foi também possível verificar que o tratamento fotodinâmico com os quatro fotossensibilizadores estudados não induz danos significativos no DNA. Verificou-se que induz um aumento dos níveis intracelulares de peróxidos, sem alteração dos níveis do radical superóxido. Verificou-se existir uma tendência para que os quatro compostos estudados neste trabalho promovam a disrupção do potencial de membrana mitocondrial, após ativação luminosa. O tratamento fotodinâmico com os quatro fotossensibilizadores referidos não leva à ativação das defesas antioxidantes, nomeadamente da enzima superóxido dismutase e do glutatião reduzido. Este trabalho revela o potencial do tratamento fotodinâmico aplicado ao retinoblastoma. Os compostos fotossensibilizadores estudados são de grande interesse e a avaliação dos mesmos em modelos in vivo hetero e ortotópicos constitui perspetiva futura.

Photodynamic therapy is presented as an emerging therapeutic modality for the treatment of cancer by inducing cell death through a mechanism involving oxidative stress after activation of photosensitizing molecules by light. This work allowed us to evaluate the photodynamic action of photosensitizers BBr2HPP, BBr2HPC, BBr2HPP-O(CH2)2OH) and BBr2HPPGluc-OAC in human retinoblastoma in vitro. The uptake studies showed no differences in uptake between different photosensitizers. Cell proliferation studies demonstrated that all four photosensitizers have a very similar effect in the retinoblastoma cells, showing IC50 values in the same order of magnitude. It was also found that the photodynamic treatment induces a decrease in protein content in retinoblastoma cell line compatible with decreased cell viability. Cell death occurs preferentially by apoptosis, supported by the appearance of a pre-G1 peak and cell cycle arrest at G2/M phase. In this work it was also possible to verify that photodynamic treatment with the four photosensitizers studied did not induce significant damage to DNA. It was found that treatment with the four photosensitizers induces an increase in intracellular levels of peroxides, exhibiting no ability to alter the levels of superoxide radical. It has been found that there is a tendency for the four compounds studied in this work to promote the disruption of the mitochondrial membrane potential after light activation. The photodynamic treatment with four referred photosensitizers does not lead to the activation of antioxidant defenses, including superoxide dismutase and reduced glutathione. This work presents great potential in photodynamic treatment of retinoblastoma based on the presented porphyrin and chlorin compounds being of great interest to evaluate the therapeutic potential of these in hetero and orthotopic models in vivo.