Effect of chitosan lactate on the formation of chitosan-DNA-particles

Abstract

Este relatório pretende demonstrar o trabalho desenvolvido ao longo do último ano e meio, no que respeita à temática de Encapsulação de DNA, usando para o efeito Partículas de Gel e Nanopartículas. O trabalho a que se refere este relatório incidiu na criação de partículas de gel, preparadas por gelificação na interface água/água, através da interacção de dois polielectrólitos de carga oposta, o DNA e um oligossacarídeo de baixo peso molecular, o lactato de quitosano. É de destacar que as partículas foram obtidas sem utilizar agentes quelantes (cross-linkers), ou solventes orgânicos. Numa segunda parte do trabalho procedeu-se à experimentação de nanopartículas de Lactato de Quitosano contendo DNA no seu interior, usando para o efeito um nebulizador, que permitiu originar pequenas gotículas de DNA. De modo a caracterizar os sistemas obtidos, estes foram estudados através de uma análise de vários parâmetros físico-químicos: morfologia e estrutura das partículas assim como o grau de complexação sofrida pela gota de DNA, cinéticas de libertação de DNA por forma a comprovar a sua estabilidade, viscosidade dos polielectrólitos de forma a poder obter partículas de gel estáveis, tamanho e a carga das partículas, estudo o qual derivou na abordagem às Nanopartículas, uma vez que estas permitiriam uma transfecção celular mais eficaz. Foi também estudado, na Facultat de Farmacia em Barcelona, o efeito de tanto o Lactato de Quitosano como as partículas obtidas, na viabilidade celular através de ensaios com sal tetrazolium MTT em linhas celulares do tipo 3T3 fibroblast, bem como a interacção destes, com outros modelos celulares mais simples como os eritrócitos. Estes estudos permitiram verificar que o Lactato de Quitosano é um promissor agente no que respeita à transferência de genes.