Please use this identifier to cite or link to this item: http://hdl.handle.net/10316/83738
Title: Défice Cognitivo Ligeiro e Doença de Alzheimer: as diferenças numa perspetiva proteómica
Authors: Freitas, Ana Karolina Seco das Neves 
Orientador: Manadas, Bruno José Fernandes Oliveira
Almeida, Luís Fernando Morgado Pereira de
Keywords: Doença de Alzheimer; Défice Cognitivo Ligeiro; líquido cefalorraquidiano; proteómica; SWATH; Alzheimer’s Disease; Mild Cognitive Impairment; cerebrospinal fluid; proteomics; SWATH
Issue Date: 24-Feb-2017
Project: info:eu-repo/grantAgreement/FCT/5876-PPCDTI/83206/PT 
Serial title, monograph or event: Défice Cognitivo Ligeiro e Doença de Alzheimer: as diferenças numa perspetiva proteómica
Place of publication or event: Centro de Neurociencias e Biologia Celular de Coimbra
Abstract: A doença de Alzheimer (DA) é responsável atualmente por cerca de 50-70% de todos os casos de demência, prevendo-se que ultrapasse 75 milhões de doentes até 2030.Clinicamente a doença é caracterizada por perda cognitiva gradual, levando a total perda das funções neurológicas e motoras. A transição entre os sintomas do envelhecimento normal e a doença é caracterizada como Défice Cognitivo Ligeiro (DCL), esta condição aumenta a probabilidade de desenvolver a DA, estimando-se que aconteça em 1/3 dos casos. DA é caracterizada ao nível molecular pela presença de placas amiloides e tranças neurofibrilares de Tau.A falta de informação sobre os mecanismos da doença não permite que haja um diagnóstico definitivo. Quanto mais avançada está a doença maior a precisão do diagnóstico, que normalmente é realizado por exclusão de outras doenças, levando a um acompanhamento inadequado do doente. A base do diagnóstico é a partir de vários exames, como por exemplo o recurso a biomarcadores, que têm vindo a chamar a atenção dos clínicos. Os biomarcadores existentes para esta patologia, embora sejam eficazes no apoio a um diagnóstico mais preciso, ainda não permitem a distinção com DCL. Desta forma, neste projeto realizou-se um estudo proteómico para encontrar possíveis biomarcadores que preencham essas lacunas.Foram analisadas e estudadas 14 e 16 amostras de líquido cefalorraquidiano (LCR) de pacientes com doença de Alzheimer e Défice Cognitivo Ligeiro, respetivamente. A análise foi realizada por cromatografia líquida acoplada à espectrometria de massa (LC-MS/MS) e quantificada através do método SWATH (do inglês Sequential Window Acquisition of all Theoretical mass spectra). As proteínas de interesse foram selecionadas por comparação entre 4 grupos: DA vs. DCL; DA (feminino vs. Masculino); feminino (DA vs. DCL) e masculino (DA vs. DCL).Após análise por diferentes métodos, foram selecionadas ao todo 26 proteínas de interesse. Observou-se uma possível relação da doença com o aparecimento precoce, uma vez que as proteínas Apolipoptroteína A1 e a Protrombina apresentam alteração acentuada nos indivíduos mais jovens. Observou-se também que as proteínas Fibulina1 e IGHG3 estão significativamente aumentadas nos indivíduos masculinos com DA podendo indicar uma diferença entre os géneros. Esta informação também é corroborada pela Análise de Componentes Principais (PCA) dos grupos de comparação entre os géneros, onde se observou uma tendência na separação entre os géneros. As restantes proteínas selecionadas estão maioritariamente relacionadas com as placas amiloides e processos inflamatórios, no entanto também foram selecionadas proteínas relacionas com processos de stresse oxidativo e com os microtúbulos. Realizou-se ainda uma PCA para o grupo DA Vs. DCL destas proteínas, que permitiu observar uma tendência na separação entre as patologias.
Actually, Alzheimer’s disease (AD) accounts about 50-70% of all dementia cases, and is expected to surpass 75 million patients by 2030.Clinically, AD is characterized by gradual cognitive loss, leading to complete loss of neurological and motor functions. The transition between the symptoms of normal aging and the disease is characterized as Mild Cognitive Impairment (MCI), and this condition increases the probability of developing AD, which is estimated to occur in 1/3 of the cases. AD is characterized by the presence of amyloid plaques and Tau neurofibrillary tangles in the brain. The lack of information on the mechanisms of the disease doesn’t allow an AD diagnosis, especially at the earliest stage. The more advanced the disease is, the greater the accuracy of the diagnosis, which is usually performed by excluding other diseases, leading to an inappropriate monitoring of the patient. The diagnosis is based on several tests, such as the use of biomarkers, which have been drawing attention of medical community.Regardless of being used to support a more accurate diagnosis, the current biomarkers for AD do not allow a distinction between AD and MCI. Thus, a proteomic study was carried out in the present study, in order to find possible biomarkers that fill these gaps.Thereby, 14 and 16 cerebrospinal fluid (CSF) samples from patients with AD and MCI respectively, were analyzed and studied. The analysis was performed by liquid chromatography coupled to sequential mass spectrometry (LC-MS/MS) and quantified by the SWATH (Sequential Window Acquisition of all Theoretical mass spectra) method. The proteins of interest were selected for comparison between 4 groups: AD vs. DCL; AD (female vs. male); Female (AD vs. MCI) and male (AD vs. MCI).Twenty-six proteins of interest were selected after analysis with different methodologies. A possible relation between the disease with early onset was observed, since the proteins Apolipoprotein A1 and Prothrombin present a marked change in the youngest individuals. It was also observed that the proteins Fibulin I and IGHG3 are significantly upregulated in the male patients with AD and this may be an indication of a gender difference in AD. This indication is also corroborated by a Principal Component Analysis (PCA), where a tendency to separate the two genders is observed.The remaining selected proteins were found to be mostly related to amyloid plaques and inflammatory processes, although also proteins related to oxidative stress and the microtubules were selected. By performing a PCA analysis comparing AD vs. MCI using these selected proteins it was possible to observe a tendency in the separation of the two pathologies.
Description: Dissertação de Mestrado em Biotecnologia Farmacêutica apresentada à Faculdade de Farmácia
URI: http://hdl.handle.net/10316/83738
Rights: embargoedAccess
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