Please use this identifier to cite or link to this item: http://hdl.handle.net/10316/36219
Title: Avaliação da resistência antimicrobiana de Aeromonas sp. e Enterobacteriaceae em robalo e dourada provenientes de sistemas de aquacultura
Authors: Gastalho, Soraia Casal
Orientador: Silva, Gabriela da
Ramos, Fernando
Keywords: Peixes; Farmacorresistência bacteriana; Resistência microbiana aos medicamentos; Dourada; Robalo
Issue Date: Sep-2013
Project: info:eu-repo/grantAgreement/FCT/COMPETE/122119/PT 
Place of publication or event: Coimbra
Abstract: Durante muitos anos, os antibióticos foram utilizados para assegurar a saúde dos animais e, assim, prevenir doenças. A administração de antibióticos tem impacto sobre o ambiente e pode conduzir ao aparecimento de resistência antimicrobiana, tanto em bactérias comensais intestinais humanas como em bactérias de peixe e no meio ambiente, com a possível propagação de genes de resistência nas populações bacterianas. Assim, o principal objectivo deste projecto foi avaliar a susceptibilidade aos antimicrobianos em bactérias potencialmente patogénicas para os seres humanos, particularmente em Aeromonas sp. e enterobactérias isoladas de robalo e dourada, a partir de sistemas adquiridos no comércio regional de aquacultura. O conteúdo intestinal e branquias foram colectados de oito robalo e seis douradas com origem em sistemas de aquacultura de Portugal, Grécia e Espanha. Inicialmente, 151 colónias fenotipicamente diversas foram colectadas a partir de meios selectivos para bactérias Gramnegativas (MacConkey e Aeromonas agar), e testados para susceptibilidade antimicrobiana contra cinco antibióticos representantes de diferentes famílias de antimicrobianos pelo método de difusão em disco. A maioria das bactérias são susceptíveis (72%) para os antibióticos testados. Só 43 bactérias mostraram resistência a um ou mais antibióticos. A maioria das bactérias Gramnegativas mostrou resistência a amoxicilina (86%), seguido de trimetoprim (58%), ácido nalidíxico (23%), cloranfenicol (21%) e trimetoprim / sulfametoxazol (7%). Todas as bactérias foram susceptíveis à tetraciclina. Estas bactérias foram presumivelmente identificados pelos métodos fenotípicos e, em seguida, por meio da amplificação de 16S rDNA e sequenciação. Para além da identificação de Aeromonas sp. e Enterobacteriaceae, foi possível encontrar outras bactérias que cresceram nos meios anteriores. A resistência foi observada em 30% das Aeromonas sp., 23% Stenotrophomonas sp., 19% de Enterobacteriaceae (Pantoea sp., Buttiauxella sp., Klebsiella sp. e Erwinia sp.), 16% de Pseudomonas sp., 5% de Acetobacter sp., 5% de Achromobacter sp. e 2% em Vibrio sp.. As -lactamases TEM e SHV foram rastreadas por PCR nos isolados resistentes à amoxicilina, mostrando que 26 das estirpes produzem uma enzima do tipo blaTEM, associada à resistência à penicilina. Foi também isolado o plasmídeo com um comprimento> 10 Kb, em uma Aeromonas sp. resistente a amoxicilina e trimetoprim, mas não foi possível observar a sua transferência para a Escherichia coli J53 receptora (azida resistente) por meio de ensaios vii de conjugação. Em conclusão, o robalo e dourada disponíveis ao consumidor final não contêm bactérias com uma alta taxa de resistência aos antibióticos, o que pode indicar uma entrega sábia e controlada dos antibióticos a peixes de aquacultura. No entanto, deve notar-se a importância da monitorização contínua da administração de antibióticos a animais para o consumo humano, bem como estudos para avaliar o potencial de resistência das bactérias patogénicas e a eventual transferência de determinantes de resistência em bactérias humanas, animais e ambientais.
During many years, antibiotics have been used to ensure the health of the animals, and thereby, preventing disease. The administration of antibiotics has impact on the environment, and may lead to the emergence of antimicrobial resistance, both in human intestinal commensal bacteria or in fish bacteria and in the environment, with possible spread of resistance genes in bacterial populations. Thus, the main objective of this project was to evaluate the susceptibility to antimicrobial agents in bacteria potentially pathogenic to humans, particularly in Aeromonas sp. and Enterobacteriaceae isolated from seabass and seabream, from aquaculture systems purchased in regional trade. The intestinal content and branchia were collected from eight sea bass and six sea bream with origin from aquaculture systems from Portugal, Greece and Spain. Initially, 151 phenotypically diverse colonies were collected from the selective media for Gram-negative bacteria (MacConkey and Aeromonas agar), and tested for antimicrobial susceptibility against five antibiotics representatives of different antimicrobial families by disc diffusion method. The majority of bacteria were susceptible (72%) to the antibiotics tested. Only 43 bacteria showed resistance to one or more antibiotics. The majority of Gram-negative bacteria showed resistance to amoxicillin (86%), followed by trimethoprim (58%), nalidixic acid (23%), chloramphenicol (21%), and trimethoprim/sulfamethoxazole (7%). All bacteria were susceptible to tetracycline. These bacteria were identified presumptively by phenotypic methods, and then, by the amplification of 16S rDNA and sequencing. Beyond the identification of Aeromonas sp. and Enterobacteriaceae, it was possible to find other bacteria that grew in the previous media. Resistance was observed in 30% of Aeromonas sp., 23% of Stenotrophomonas sp., 19% of Enterobacteriaceae (Pantoea sp., Buttiauxella sp., Klebsiella sp. and Erwinia sp.), 16% of Pseudomonas sp., 5% of Acetobacter sp., 5% of Achromobacter sp. and 2% in Vibrio sp.. The beta-lactamases TEM and SHV were screened by PCR in the isolates resistant to amoxicillin, showing that 26 of the strains produced a blaTEM-type enzyme, which was associated with the resistance to this penicillin. However, an amoxicillin- and trimethoprim-resistant Aeromonas sp. isolate that carried a plasmid with a lenght >10 Kb, it was not possible observe its transfer to the recipient Escherichia coli J53 (azide resistant) by conjugation assays. In conclusion, the sea bass and sea bream available to the final consumer do not contain v bacteria with a high rate of antibiotic resistance, what might indicate a wise and controlled antibiotic delivery to aquaculture fish. However, it should be noted the importance of the continuous monitoring of the administration of antibiotics to the animals for human consumption as well as studies to evaluate the resistance of potential pathogenic bacteria and the possible transfer of resistance determinants into human/animal and environmental bacteria.
Description: Dissertação de mestrado em Segurança Alimentar, apresentada à Faculdade de Farmácia da Universidade de Coimbra
URI: http://hdl.handle.net/10316/36219
Rights: openAccess
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UC - Dissertações de Mestrado

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