Please use this identifier to cite or link to this item:
https://hdl.handle.net/10316/30586
Title: | Antitumor activity of splicing inhibitor pladienolide B in erythroleukemia: a study in cell lines | Authors: | Petronilho, Sara Lopes | Orientador: | Ribeiro, Ana Bela Sarmento Antunes Cruz Gonçalves, Ana Cristina Pereira |
Keywords: | Pladienolide B; Splicing inhibitor; SF3B1; AML; Erythroleukemia | Issue Date: | 2015 | Abstract: | The splicing of pre-mRNA into functional mRNA, carried out by the spliceosome,
represents a crucial step for the cell's genetic expression. Mutations in some of the
spliceosome’s components have been identified in several hematological malignancies,
including myelodysplastic syndromes and acute myeloid leukemia (AML), which could
constitute a potential therapeutic target to be explored. In this context, we evaluated the
therapeutic potential of a splicing inhibitor, Pladienolide B (Pla-B), in two erythroleukemia
cell-lines.
K562 and HEL cells were incubated in the absence or presence of increasing
concentrations of Pla-B in single dose (from 0.25 to 100 nM) and in daily administration (for
0.5 nM). Cell viability and density were evaluated using the trypan blue method. Cell death
was determined by optical microscopy (May-Grunwald Giemsa staining) and flow cytometry
(FC). Cell cycle analysis was evaluated by FC, using a PI/RNAse solution. DNA sequencing
was performed to assess the presence of SF3B1 mutations in exons 14 and 15.
Treatment with Pla-B significantly decreased the viability and proliferation of the
K562 and HEL cells in a time, concentration and administration schedule dependent manner.
HEL cells were more sensible to Pla-B than K562 cells (after 72 hours of incubation the IC50
was 1.5 nM and 25 nM, respectively), which may be due to different cell genetic
backgrounds. In fact, K562 cells present the BCR-ABL fusion gene and HEL cells the JAK2
V617F mutation. However, SF3B1 mutations in exons 14 or 15 were not detected in any cell
model used, suggesting that the observed cytotoxic effect is not dependent on this
spliceosome mutation. Pla-B induced cell death preferentially by apoptosis and induced also
an accumulation of cells in the G0/G1 phase of the cell cycle. Our results show that Pla-B induces a cytostatic and cytotoxic effect in K562 and HEL
cells, suggesting that Pla-B could represent a new therapeutic approach in the treatment of
erythroleukemia. O splicing de pre-mRNA em mRNA funcional, mediado pelo spliceossoma, representa uma etapa fundamental na expressão genética da célula. Nos últimos anos, mutações em alguns dos componentes do spliceossoma foram identificadas em várias neoplasias hematológicas, incluindo síndromes mielodisplásicos e leucemia mielóide aguda, representando alvos terapêuticos por explorar. Neste contexto, avaliámos o potencial terapêutico de um inibidor do splicing, Pladienolide B (Pla-B), em duas linhas celulares de eritroleucemia. As células K562 e HEL foram incubadas na presença ou ausência de concentrações crescentes de Pla-B, em dose única (0.25 nM a 100 nM) e dose diária (0.5 nM). A viabilidade e a densidade celulares foram avaliadas pelo método de azul tripano. A morte celular foi determinada por microscopia óptica (coloração de May-Grunwald Giemsa) e citometria de fluxo (FC). A análise do ciclo celular foi realizada por FC, usando uma solução de PI/RNAse. Mutações nos exões 14 ou 15 do gene SF3B1 foram pesquisadas através de sequenciação do DNA. O tratamento das células K562 e HEL com Pla-B reduziu significativamente a viabilidade e proliferação celulares, de um modo dependente de tempo, concentração e modo de administração do fármaco. As células HEL mostraram-se mais sensíveis ao fármaco do que as células K562 (após 72 horas de incubação, o IC50 foi de 1.5 nM e 25 nM, respectivamente), o que pode ser devido a diferenças genéticas. De facto, as células K562 apresentam o gene de fusão BCR-ABL, enquanto as HEL apresentam a mutação do JAK2 V617F. No entanto, não foram encontradas mutações, em nenhum dos modelos, nos exões 14 ou 15 do gene SF3B1, o que sugere que o efeito citotóxico observado não é dependente desta mutação. Verificámos que o Pla-B induz morte celular preferencialmente por apoptose, bem como induz uma acumulação das células na fase G0/G1 do ciclo celular. Mutações nos exões 14 e 15 do gene SF3B1 foram excluídas. Os nossos resultados sugerem que o Pla-B apresenta um efeito anti-proliferativo e citotóxico em ambas as linhas celulares, e que poderá representar uma nova abordagem terapêutica no tratamento da eritroleucemia. |
Description: | Trabalho final de mestrado integrado em Medicina (Hematologia/Biologia Molecular), apresentado à Faculdade de Medicina da Universidade de Coimbra. | URI: | https://hdl.handle.net/10316/30586 | Rights: | openAccess |
Appears in Collections: | UC - Dissertações de Mestrado FMUC Medicina - Teses de Mestrado |
Files in This Item:
File | Description | Size | Format | |
---|---|---|---|---|
Antitumor activity of splicing inhibitor Pladienolide B in erythroleukemia – a study in cell lines_FMUC2015_Sara Petronilho.pdf | 850.59 kB | Adobe PDF | View/Open |
Page view(s)
389
checked on Oct 15, 2024
Download(s) 50
626
checked on Oct 15, 2024
Google ScholarTM
Check
Items in DSpace are protected by copyright, with all rights reserved, unless otherwise indicated.