Please use this identifier to cite or link to this item: http://hdl.handle.net/10316/18584
Title: P53, MDM2 and P14ARF immunohistochemical expression in retinoblastoma
Authors: Fonseca, Maria Cristina Dias Ferrão 
Orientador: Proença, Rui Daniel Mateus Barreiros
Carvalho, Lina Maria Rodrigues de
Keywords: Imuno-histoquímica; Retinoblastoma
Issue Date: 2010
Abstract: Introdução: O retinoblastoma é o tumor maligno intraocular primário mais comum em idade pediátrica. Knudson apresentou a proposta do modelo two-hit, permitindo distinguir dois grandes grupos de tumores: hereditários e não hereditários. Estabeleceu-se um nexo de causalidade entre a mutação no gene supressor tumoral RB1 (cromossoma 13q14) e o desenvolvimento do retinoblastoma. Evidências actuais sugeriram que a inactivação bialélica do gene RB1 é a lesão iniciadora, mas não é suficiente para a progressão completa do retinoblastoma [1]. Assim, para explicar o desenvolvimento deste tumor, foi proposta a hipótese de uma expressão alterada da via supressora tumoral p14ARF-MDM2-p53 [2]. Trabalhos anteriores demonstraram que a expressão da proteína p14ARF era indetectável, ao contrário da Mdm2, que se apresentava sobre-expressa no retinoblastoma [3]. Objectivos: O objectivo deste trabalho foi avaliar a expressão imunohistoquímica dos componentes da via p53 (p14ARF, Mdm2 e p53) para melhor compreender a patogenia e diferenciação moleculares do retinoblastoma. Tentou-se também, correlacionar a expressão destas proteínas com parâmetros clínicos dos doentes, nomeadamente o padrão de hereditariedade do tumor, estádio de Reese-Ellsworth e prognóstico vital. Material e métodos: Foram obtidos 24 cortes histológicos de retinoblastomas de 22 doentes enucleados, provenientes do material em arquivo no Laboratório de Patologia Oftálmica dos HUC. Os seus registos clínicos foram consultados para recolher informação, incluindo idade, género, padrão de hereditariedade, estádio de Reese-Ellsworth e prognóstico vital. O estudo imunohistoquímico foi realizado em cortes histológicos de retinoblastoma incluídos em parafina. Resultados: Foi obtida positividade da expressão das proteínas p53, p14ARF e Mdm2 em 87,5% (21/24), 87,5% (21/24) e 95,8% (23/24) das 24 amostras de retinoblastomas, respectivamente. Globalmente, a expressão de p53 não se correlaciona positivamente com a P53,MDM2 AND P14ARF IMMUNOHISTOCHEMICAL EXPRESSION IN RETINOBLASTOMA 11 expressão de p14ARF (p=0,343) nem de Mdm2 (p=1,000). Adicionalmente, a expressão de p14ARF foi demonstrada principalmente em amostras de tumores com positividade de expressão para as proteínas p53 e Mdm2, simultaneamente. Igualmente, não foi possível estabelecer qualquer relação entre as expressões das proteínas p53, p14ARF e Mdm2 e os parâmetros clínicos analisados (padrão de hereditariedade, estádio de Reese-Ellsworth e prognóstico vital). Conclusões: Neste estudo observámos que 87,4% dos casos apresentaram marcação nuclear e nucleolar da proteína p14ARF e, concomitantemente, documentámos a sobreexpressão da desta proteína em metade dos casos, contrariamente a resultados de trabalhos anteriores [3]. De acordo com os nossos resultados, obtivemos sobre-expressão da proteína Mdm2 em 79,2% das amostras de retinoblastomas, o que está de acordo com a hipótese que defende que a sobre-expressão do MDM2 será um elemento importante na patogenia molecular do retinoblastoma [2,4]. A pequena amostra de doentes utilizada neste estudo comprometeu os resultados finais, nos quais não se demonstrou qualquer relação estatisticamente significativa entre os parâmetros considerados. Futuros estudos devem ser realizados no sentido de estabelecer o verdadeiro valor prognóstico destes marcadores histológicos, recorrendo a uma amostra populacional de dimensões superiores.
Introduction: Retinoblastoma is the most common primary ocular malignancy in pediatric age. Knudson proposed his two-hit model, allowing the distinction of retinoblastoma in two major classes: heritable and non-heritable. Retinoblastoma was first considered to arise from a well known mutation in the RB1 tumor-suppressor gene (chromosome 13q14). Currently, evidence supports that biallelic inactivation of RB1 gene is the initiating event, but not sufficient for fully malignant progression [1]. The hypothesis of altered expression of p14ARF-MDM2-p53 surveillance pathway components was proposed as an attempt to explain fully retinoblastoma development [2]. Previous studies proposed that p14ARF protein expression was undetectable, in contrast with Mdm2 protein overexpression in retinoblastoma [3]. Objectives: The aim of this study was to evaluate the immunohistochemical expression of p53 pathway components (p14ARF, Mdm2 and p53) in order to a better understanding of the molecular pathogenesis and differentiation of retinoblastoma. Additionally, it was attempted to correlate the expression of these proteins with retinoblastoma’s heritable pattern, Reese-Ellsworth staging and vital prognosis. Methods: A cohort of 24 retinoblastoma tissue samples from 22 enucleated cases was obtained from the registry of HUC’s Ophthalmic Pathology Laboratory. Clinical records were consulted to collect information including gender, age, heritable pattern, Reese-Ellsworth stage and prognosis. Immunohistochemistry was performed on formalin-fixed, paraffinembedded retinoblastoma tissue samples using primary antibodies against p53, p14ARF and Mdm2. Results: Positive p53, p14ARF and Mdm2 expression was obtained in 87.5% (21/24), 87.5% (21/24) and 95.8% (23/24) of the 24 samples, respectively. Overall, p53 protein expression was not positively correlated neither with p14ARF (p=0.343) nor Mdm2 expression P53,MDM2 AND P14ARF IMMUNOHISTOCHEMICAL EXPRESSION IN RETINOBLASTOMA 9 (p=1.000). In addition, p14ARF expression was mainly found in tissue samples that were positive for both p53 and Mdm2. Moreover, we did not obtain a positive relationship between p53, p14ARF and Mdm2 expression and the analyzed clinical parameters (heritable pattern, vital prognosis and Reese-Ellsworth staging). Conclusions: In our study, we obtained 87.4% of positive p14ARF nuclear and nucleolar expression and we even documented the presence of p14ARF overexpression in half of the cases, in opposition to previous reports [3]. According to our results, there was a Mdm2 overexpression in 79.2% of retinoblastoma samples, which supports the hypothesis that MDM2 overexpression may be an important element in retinoblastoma molecular pathogenesis [2,4]. The small cohort of patients involved in this study compromised the final results, which did not show any statistical significance. Further studies need to be performed in order to establish the true prognostic value of these histological markers, using a larger retinoblastoma patient’s population.
URI: http://hdl.handle.net/10316/18584
Rights: openAccess
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