INSIGHTS INTO MOLECULAR CYTOGENETIC ROUTINE DIAGNOSIS AND CHARACTERIZATION OF REPEATEDLY SHOWING UP CONSTITUTIVE CHROMOSOMAL INVERSIONS

Abstract

Inversões pericêntricas e paracêntricas referem-se a anomalias cromossómicas que resultam de quebras em ambos os braços ou num único braço de um cromossoma. Estas anomalias cromossómicas não estão, normalmente, relacionadas com alterações fenotípicas, sendo, normalmente, associadas com problemas de infertilidade. Embora a maioria das inversões sejam de novo e únicas, inversões com pontos de quebra repetidos já foram relatadas.Ao longo desta dissertação de mestrado, foram estudados os pontos de quebra de cinco inversões, quatro paracêntricas e uma pericêntrica, em vinte pacientes que sofriam de problemas de fertilidade, para deteminar se estes são recorrentes ou se ocorrem em locais diferentes do cromossoma. Os pacientes tinham já sido diagnosticados por citogenética convencional. Neste trabalho, a técnica Fluorescence in situ Hybridization multicolor (m-FISH) foi aplicada usando várias sondas locus específico, centroméricas e/ou pintura em preparações citogenéticas derivadas de sangue periférico, isto é, cromossomas metafásicos.A interpretação dos resultados obtidos permitiu identificar pontos de quebra recorrentes em todas as inversões estudadas, em pelo menos um dos pontos de quebra envolvidos. No entanto, também foram encontrado pontos de quebra com localização única. Este trabalho corrobora a hipótese de que alterações cromossómicas equilibradas aparentemente únicas podem vir a ser identificadas em indivíduos não relacionados, representado, desta forma, variantes cromossómicas raras que se encontram na população em geral.

Pericentric and paracentric inversions refer to chromosomal aberrations that are the result of breakpoints found in both arms or in the same arm of a chromosome. It is often the case that such aberrations are not associated with phenotypic alterations being nonetheless possibly related with fertility problems. Although the majority of inversions are de novo and unique, there have been reports of recurrent breakpoints, as well. Throughout the course of this master’s dissertation, the breakpoints of five inversions, four paracentric and one pericentric, within twenty patients who were suffering from fertility problems were studied to determine whether the inversions are recurrent or occur at different locations of the corresponding chromosomes. Inversion carriers have been identified by routine banding cytogenetics. Here multicolour fluorescence in situ hybridization (m-FISH) technique was applied using various locus-specific, centromeric and/or painting probes on peripheral blood derived cytogenetic preparations, this is metaphase chromosomes.The interpretation of the results obtained allowed the identification of recurrent breakpoints within all the studied inversions, in at least one of the breakpoints involved. However, breakpoints with unique location were also found. This work corroborates with the hypothesis that seemingly unique unrecognized balanced aberration may be identify in unrelated individuals, representing rare chromosomal variants potentially spreading in populations.