Variabilidade genética e análise multi-loci em isolados do fungo ectomicorrízico Cenococcum geophilum das áreas ultramáficas do Nordeste de Portugal

Abstract

No presente trabalho de investigação, foram caracterizados – sob os pontos de vista molecular, citogenético e bioquímico – vários isolados do fungo ectomicorrízico Cenococcum geophilum. Este micobionte forma ectomicorrizas com várias espécies e em particular com a azinheira (Quercus ilex), inclusive nas áreas ultramáficas do NE de Portugal. Quercus ilex é a única espécie arbórea que consegue sobreviver nos solos ultramáficos do NE transmontano. Esta simbiose deve desempenhar um papel muito importante na protecção das azinheiras destas áreas, contra o stress provocado pelas elevadas concentrações de metais pesados (Cr, Co, Ni) e pela escassez de água. Os isolados fúngicos foram caracterizados por vários marcadores genéticos, destacando-se a análise de PCR-RFLP do rDNA (nas regiões IGS e ITS), ISSR e AFLP. A análise de PCR-RFLP do rDNA mostrou-se útil na distinção de isolados pertencentes a tipos morfológicos diferentes. A amplificação da região IGS1 levou à obtenção de padrões genéticos característicos para cada isolado. A técnica de ISSR mostrou-se útil na distinção entre isolados ou entre grupos de isolados, permitindo agrupar os mesmos segundo os tipos morfológicos. A técnica de AFLP revelou um índice de discriminação genotípica de 100 %. Os padrões de AFLP relacionam-se com diferentes níveis de tolerância ao Ni. O número básico de C. geophilum é n = 6, observando-se aneuploidias em isolados da área ultramáfica. Quanto aos marcadores bioquímicos, os isolados da área serpentínica revelaram uma maior diversidade de ACPH e EST, relacionando-se também estes dados com a tolerância demonstrada ao Ni in vitro. Alguns isolados foram alvo duma caracterização proteómica feita por electroforese 2D e da pesquisa de metalotioninas por coloração histoquímica. Com os resultados obtidos foi-nos possível definir isolados geneticamente distintos. Estes dados são de extrema importância, tendo em vista futuros programas de revegetação em áreas sujeitas a stress hídrico e/ou provocado por metais pesados, sabendo-se da protecção que as micorrizas conferem.