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Title: Optimization of a viral culture system to evaluate antiviral activity
Authors: Ferreira, Nânci Lúcia dos Santos
Orientador: Nogueira, Célia Laurinda dos Santos
Keywords: Infecções virais; Cultura de vírus
Issue Date: 2015
Abstract: A otimização de um sistema de cultura viral para avaliar a atividade antiviral de compostos naturais tem grande importância hoje em dia devido à falta de tratamento para a maioria das infeções virais. Este estudo envolve a otimização de dois modelos de infeção, modelo HEK- 293T/Lentivirus e modelo Caco-2/Coxsackievirus A12; avaliação do potencial antivírico com diferentes tratamentos e avaliação da citotoxicidade dos extratos nas linhas celulares utilizadas nos modelos, linha celular HEK-293T e linha celular Caco-2. Estes modelos de infeção foram utilizados no screening do potencial antiviral de cinco extratos naturais: extrato de azeitona Cobrançosa (CO) e azeitona Maçanilha (MO), extrato do tetrasporófito (T) e gametófito feminino (FG) da alga Chondracanthus teedei var. lusitanicus e extrato da alga Osmundea pinnatifida (OP). Antes da realização dos ensaios antivirais foi testada a citotoxicidade dos extratos. O extrato OP foi o único que se revelou tóxico nas linhas celulares estudadas. No modelo HEK-293T/Lentivirus todos os extratos apresentaram potencial antiviral ao induzir um efeito protetor na célula (i) e um efeito virucida (ii). A infeção foi quantificada por microscopia de fluorescência. No modelo Caco-2/Coxsackievirus A12 todos os extratos revelaram potencial como agentes virucidas (ii). Apenas os extratos CO e MO induziram nas células um efeito protetor contra a infeção (i) e apenas o extrato OP revelou efeito antiviral quando adicionado após a infeção (iii). Uma quantificação relativa da infeção por CVA12 foi por RTPCR em tempo real e normalizada com o gene 18S. Estes resultados sugerem que os extratos CO, MO e OP têm um efeito inibitório na fase inicial da infeção pelo LV sendo, por isso, candidatos a ser usados na profilaxia desta infeção, assim como os extratos CO e MO na infeção por Coxsackievirus A12. O extrato OP parece ser um bom candidato para a terapêutica da infeção pelo Coxsackievirus A12 porque demonstra atividade inibitória a nível da replicação viral
Optimization of a viral culture system to evaluate antiviral activity of natural compounds have great importance nowadays due to the lack of antiviral treatment for the majority viral infections. This study involves the in vitro optimization of two models of viral infection, HEK- 293T/Lentivirus model and Caco-2/Coxsackievirus A12 model; evaluation of antiviral potential at different treatment conditions and evaluation of extracts cytotoxicity on the studied cell lines, HEK-293T and Caco-2 cell line. This models were applied on the screening of the antiviral potential of five natural extracts: Cobrançosa Olive (CO) and Maçanilha Olive (MO) extracts, Tetrasporophyte (T) and Female gametophyte (FG) of Chondracanthus teedei var. lusitanicus algae and Osmundea pinnatifida (OP) extract. Prior to antiviral assays it was evaluated the cytotoxicity of the listed extracts. Only OP extract reveal cytotoxicity on the cell lines studied. On the HEK-293T/Lentivirus model, all extracts presented antiviral potential by protecting the cell (i) and virucidal effect (ii). The infection in this model was quantify by fluorescence microscopy. On Caco-2/Coxsackievirus A12 model, all extracts reveal potential as virucidal agents (ii). Only CO and MO reveal potential to protect cells against infection (i) and only OP extract reveal antiviral effectiveness when added post-infection (iii). CVA12 infection was relatively quantify by RT real time PCR and normalized with 18S. These results suggest that extracts CO, MO and OP have a inhibitory effect of LV infection at an early stage and can therefore being candidates for prophylactic intervention, as well as extracts CO and MO for Coxsackievirus A12 infection. OP extract it may be a candidate for therapeutic intervention on Coxsackievirus A12 infection because exhibits inhibitory effect in viral replication
Description: Dissertação de mestrado em Análises Clínicas, apresentada à Faculdade de Farmácia da Universidade de Coimbra.
URI: https://hdl.handle.net/10316/32188
Rights: openAccess
Appears in Collections:FFUC- Teses de Mestrado

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