Interacção da calmodulina com membranas sinápticas : efeito de trifluoperazina

Abstract

A calmodulina (CaM) é uma proteína multifuncional que liga Ca2+ e medeia acções do cálcio no metabolismo dos nucleótidos cíclicos, fluxos de Ca2+, fosforilação de proteínas, regulação do citoesqueleto e neurotransmissão, assim a identificação dos locais de ligação da CaM é essencial para compreender a regulação dos sistemas biológicos pelo Ca2+. A ligação do Ca2+ à CaM induz a exposição dum domínio hidrofóbico responsável pela interacção da CaM com proteínas alvo e fármacos. A CaM bovina foi purificada com elevado rendimento (100mg/Kg de cortex cerebral) por um método rápido que envolve: homogeneização, tratamento pelo calor a 100ºC, cromatografia em DEAE-celulose a pH 7,5 e 5,5, precipitação isoeléctrica (pH =4) na presença de (NH)4)2SO4 a 50% de saturação e cromatografia em «Sephadex» G-100. Neste trabalho, o ensaio biológico da CaM baseado na estimulação da (Ca2+ +Mg2+ ) ATPase das membranas dos eritrócitos, permitiu detectar a CaM a baixas concentrações (0,6 µg/ml de ensaio) durante o processo de purificação. A CaM iodinada com o reagente de Bolton Hunter (125I –CaM) foi posteriormente utilizada, para a caracterizar em termos físico-químicos a ligação da 125I –CaM às membranas sinápticas (SPM) do cortex, do núcleo caudado e do cerebelo. Os resultados obtidos mostram que a 125 I-CaM interage com as proteínas membranares e depende fortemente da concentração de Ca2+ livre (pCa). A ligação da 125I-CaM às SPM a diferentes valores de pCa ( A trifluoperazina (TFP), um fármaco neuroléptico, inibe a ligação da 125I –CaM ás SPM das fracções membranares estudadas. A inibição não é específica e poderá ser devida, para além de interacção directa de TFP com CaM, à interacção da TFP com as proteínas e lípidos membranares.