Transferência adotiva de células para imunoterapia em tumores sólidos : ativação e expansão de células Natural Killer para erradicação de células malignas

Abstract

O cancro do Pâncreas (CP) e o Colo-retal (CCR) são dois dos carcinomas com uma malignidade devastadora onde o prognóstico de sobrevivência é extremamente fraco. Esta malignidade está relacionada com o facto de os tumores evoluírem rapidamente e com poucos sintomas específicos levando a que o diagnóstico seja feito apenas num estadio avançado na maioria dos pacientes. Estes tumores possuem elevadas taxas de recorrência e de metastização, diminuindo assim ainda mais a taxa de sobrevivência. As células Natural Killer (NK) foram definidas inicialmente como linfócitos efetores da imunidade inata dotados com funções citolíticas. Mais recentemente, uma nova visão sobre as NK tem emergido. As células NK são agora reconhecidas por expressarem um repertório vasto e complexo de recetores ativadores e inibidores que estão calibrados para garantir a tolerância do próprio enquanto permite uma grande eficácia contra ataques, como infeções virais ou desenvolvimento tumoral. Neste estudo pretendeu-se fazer uma caracterização fenotípica e funcional de linhas celulares tumorais de Cancro do Pâncreas, de Cancro Colo-retal e de Leucemia Mieloide Crónica. O principal objetivo deste trabalho foi fazer uma ativação e expansão in vitro de células NK de dadores saudáveis seguido de co-cultura com as células tumorais de modo a medir o efeito de citocinas, de agonistas dos TLRs e do uso de anticorpos nãodepletantes na atividade citotóxica das NK. Foi demonstrado que as linhas celulares tumorais possuem uma maior expressão de recetores inibidores de superfície (ligandos HLA-ABC e PVR) comparativamente com os recetores ativadores. Estes recetores inibidores são reconhecidos pelas células NK emitindo um sinal inibidor e dificultando a atividade citotóxica das mesmas. Foi demonstrado que a estimulação com Interleucina-2 (IL-2) promove a ativação das células NK aumentando significativamente a sua atividade citotóxica contra as células tumorais em estudo. Ficou ainda demonstrado que esta mesma estimulação com IL-2 contraria o efeito de anergização das células NK provocada pela libertação de citocinas pelas células tumorais. Com este estudo foi demonstrado que as células NK podem-se tornar uma ferramenta imunoterapeutica importante no tratamento destas patologias.

Pancreatic cancer (PC) and Colo-retal cancer (CRC) are two type of carcinoma with devastating malignancy where survival prognosis is extremely low. The high malignancy is related to the rapid evolution of the tumours was well as the few specific symptoms associated with these conditions, which typically lead to a late diagnosis. Moreover, these tumours are also characterized by a high rate of recurrence and metastasization, further decreasing the survival rate. Natural Killer cells (NK) were initially defined as effector lymphocytes of innate immunity endowed with catalytic capabilities. More recently, a new vision concerning NK has emerged. NK cells are now recognized for expressing a vast and complex array of activator and inhibitor receptors which are calibrated as so to ensure self-tolerance while allowing great efficacy against attacks like viral infections or tumoral development. The intentional of this study was the functional and phenotypic characterization of tumoral cell lines of Pancreatic Cancer, Colorectal Cancer and Chronic Myelogenous Leukemia. The principal objective of this work was to achieve in vitro activation and expansion of NK cells from healthy donors followed by co-culture with tumoral cells in order to evaluate the effect of cytokines and non-depletant antibodies in cytotoxic activity of NK cells. It was demonstrated that tumor cell lines from PC and CRC have greater expression of surface inhibitor receptors (ligands HLA-ABC and PVR) when compared to activator receptors. Such inhibitor receptors are recognized by NK cells and send an inhibitor signal that hinders their cytotoxic activity. It was demonstrated that stimulation with Interleukin-2 (IL-2) promotes NK cells activation which significantly increases their cytotoxic activity against tumor cells under study. It was also demonstrated that such IL-2 stimulation counteracts the effect of “splitanergy” of NK cells that is caused by the release of cytokines by tumor cells. With this, NK cells can become an important immunotherapeutic tool in the treatment of these pathologies.