Epigenetics: a new therapeutic approach in chronic lymphocytic leukemia

Abstract

Introdução/Objetivos: Atualmente, as alterações epigenéticas têm demonstrado uma possível nova contribuição para o desenvolvimento da Leucemia Linfocítica Crónica B (LLC-B), nomeadamente as desacetilases das histonas e as DNA metiltransferases. Este trabalho tem por objetivo estudar o potencial papel terapêutico dos agentes hipometilantes e dos inibidores das desacetilases das histonas, em monoterapia e em associação terapêutica, numa linha celular de LLC-B. Materiais e Métodos: A linha celular de LLC-B foi incubada com um agente hipometilante, decitabina, e com um inibidor das desacetilases das histonas, tricostatina A, em diferentes concentrações; os estudos de viabilidade e proliferação foram realizados, utilizando o teste resazurina; a morte celular foi analisada pela citometria de fluxo e por microscopia ótica; os estudos de metilação foram realizados usando o PCR específico de metilação e o PCR em tempo real. Resultados: Os nossos resultados mostraram que estes compostos induzem diminuição da proliferação e da viabilidade celular de modo dependente da dose e do tempo de exposição, conduzindo a morte celular preferencialmente por apoptose. Para além disso, observou-se diminuição do grau de metilação genética. Discussão: Este artigo sugere que a modulação epigenética pode constituir uma nova abordagem ao tratamento das neoplasias linfoides, nomeadamente na LLC-B. Background/Aims: Nowadays, epigenetic changes have highlighted a new possible contribution to the development of Chronic Lymphocytic Leukemia B (CLL-B), namely by histone deacetylases or DNA metiltransferases. This project aims to study the potential therapeutic role of hypomethylating agents (HM) and histone deacetylase inhibitors (HDACis), in monotherapy and in association of both drugs, in a CLL-B cell line. Materials and Methods: A CLL-B cell line was incubated with the HM agent, decitabine (DAC), and the HDACi, trichostatin A (TSA), at different concentrations; viability and proliferation studies were performed using resazurin test; cell death was analyzed by flow cytometry and optical microscopy; methylation studies were performed using Methylation specific-PCR (MSP) and Real-Time PCR (qPCR). Results: Our results show a decrease in cell proliferation and viability in a dose and time dependent manner, leading to a cell death preferentially by apoptosis. Besides that, a decrease in the degree of gene methylation was also reached. Discussion: This study suggests that epigenetic modulation might constitute a new approach to the treatment of lymphoid malignancies, namely CLL-B.