Please use this identifier to cite or link to this item: http://hdl.handle.net/10316/31299
Title: Role of Sirtuin 3 on Doxorubicin-induced Toxicity on H9c2 Cardiomyoblasts
Authors: Coelho, Ana Raquel Ligeiro 
Orientador: OliveiraPaulo Jorge G. S. da Silva Oliveira, Paulo Jorge G. S. da Silva
Moreno, António
Keywords: Sirtuína 3; Doxorrubicina; Cardiotoxicidade; Morte celular e protecção
Issue Date: 2014
Citation: COELHO, Ana Raquel Ligeiro - Role of Sirtuin 3 on Doxorubicin-induced Toxicity on H9c2 Cardiomyoblasts. Coimbra : [s.n.], 2014. Dissertação de mestrado em Biologia Celular e Molecular
Place of publication or event: Coimbra
Abstract: A antraciclina Doxorrubicina (DOX) é um dos mais usados agentes antineoplásicos. No entanto, o tratamento com este composto está associado com cardiotoxicidade, que é dependente da dose e da sua acumulação. A mitocondrial Sirtuína 3 (Sirt3) é a maior deacetilase mitocondrial, modulando diversas vias, tal como a apoptose e o metabolismo celular. Assim a nossa hipótese é que a actividade da Sirt3 diminui a cardiotoxicidade induzida pela DOX. Os cardiomioblastos H9c2 foram transfectados com siRNA e plasmídeos para produzir células com Sirt3 silenciada e sobreexpressa, respectivamente. A toxicidade da DOX (0.5 e 1 µM) foi avaliada pelo ensaio da Sulforodamina B e por citometria de fluxo. A despolarização mitocondrial e a produção do anião superóxido foi determinada por microscopia de fluorescência e o conteúdo de proteínas específicas por western blot. A sobre e sub-expressão da Sirt3 foi confirmada por western blot e RT-PCR. A toxicidade da DOX envolveu a indução de morte celular em todos os grupos. O aumento do conteúdo de Sirt3 mediado pela sobreexpressão parece diminuir a toxicidade da DOX, maioritariamente pela manutenção da integridade da rede mitocondrial e redução do stress oxidativo. Por outro lado, a p53 parece ser um alvo directo da Sirt3 e a protecção conferida contra a morte celular pela Sirt3 pode ser relacionada com esta proteína.
The anthracycline Doxorubicin (DOX) is one of the most widely used anti-neoplastic agents. However, treatment with this drug is associated with a cumulative and dose dependent cardiotoxicity. Mitochondrial Sirtuin 3 (Sirt3) is the major mitochondrial deacetylase, modulating several pathways, such as apoptosis and metabolism. Thus, our hypothesis is that mitochondrial Sirt3 activity decreases DOX-induced cardiotoxicity. H9c2 cardiomyoblasts were transfected with siRNA and a plasmid construct to produce Sirt3 knock-down and Sirt3 overexpressing cells, respectively. DOX (0.5µM and 1µM) toxicity was evaluated by the Sulforhodamine B assay and by flow cytometry using the Life/Death assay. Mitochondrial depolarization and superoxide production was determined by fluorescence microscopy and content in specific proteins by western blot. Sirt3 overexpression or knock-down was confirmed by Western Blot and qRT-PCR. In all experimental groups, DOX induced cell death. Increase in Sirt3 content by transfection-mediated overexpression appeared to decrease DOX toxicity, most by maintaining the integrity of mitochondrial network and reducing oxidative stress. On the other hand, p53 seems to be a direct target of Sirt3 and the protection against cell death conferred by Sirt3 could be related to this protein.
Description: Dissertação de mestrado em Biologia Celular e Molecular, apresentada ao Departamento de Ciências da Vida da Faculdade de Ciências e Tecnologia da Universidade de Coimbra.
URI: http://hdl.handle.net/10316/31299
Rights: openAccess
Appears in Collections:FCTUC Ciências da Vida - Teses de Mestrado

Files in This Item:
File Description SizeFormat
Tese_Ana_Raquel.pdf3.6 MBAdobe PDFView/Open
Show full item record

Page view(s)

91
checked on Dec 4, 2019

Download(s)

90
checked on Dec 4, 2019

Google ScholarTM

Check


Items in DSpace are protected by copyright, with all rights reserved, unless otherwise indicated.