Percentagem de plaquetas reticuladas : um parâmetro útil no diagnóstico da Púrpura Trombocitopénica Imune Primária

Abstract

A Púrpura Trombocitopénica Imune (PTI) é uma doença auto-imune que se caracteriza pela presença de auto-anticorpos contra as glicoproteínas plaquetares, que levam à destruição das plaquetas no sistema reticulo-endotelial. Para o diagnóstico diferencial entre trombocitopenias por hiperdestruição periférica, como a PTI, ou por hipoprodução medular (aplasia ou invasão medular por proliferação celular anormal) é necessário, frequentemente, fazer a observação morfológica da medula óssea. As plaquetas reticuladas (rP – reticulated platelet) são plaquetas recentemente libertadas da medula óssea, têm um maior volume, são mais densas e têm ácido ribonucleico (RNA – ribonucleic acid) residual. A percentagem de rP (%rP) é um novo parâmetro plaquetar do CELL-DYN® Sapphire que utiliza o marcador de fluorescência CD4K-530. Objectivo: O objectivo principal deste trabalho é determinar a fiabilidade da %rP na avaliação da actividade trombopoiética da medula óssea, com o intuito de vir a substituir o medulograma na abordagem diagnóstica da maioria dos casos de PTI primária. Material e métodos: Em 139 amostras de sangue periférico, colhidas em ácido etilenodiaminotetracético tripotássico (EDTA K3 – ethylenediaminetetraacetic acid tripotassic), foram determinados os diferentes parâmetros plaquetares, incluindo a %rP, e a contagem de reticulócitos. Foi utilizado um equipamento CELL-DYN® Sapphire com tecnologia de citometria de fluxo. O valor de %rP foi obtido por metodologia óptica, por detecção da dispersão do feixe de luz (laser) nos ângulos 7º e 90º, e por fluorescência emitida por CD4K-530, um marcador de RNA. As amostras foram divididas em 4 grupos: PTI primária n=34; trombocitopenia induzida por quimioterapian=11; anemia hemolítica autoimune (AHAI) n=18; e controlo n=76. A análise estatística foi efectuada com o software StatView 5.0. Resultados: No grupo com PTI primária foi encontrada uma média (± desvio padrão) de percentagem de plaquetas reticuladas de 6.435 ± 3.584%; no grupo com trombocitopenia induzida por quimioterapia, 2.649 ± 1.382%; no grupo com AHAI, 2.012 ± 1.130%; e no grupo controlo, 1.632 ± 0.985%. As diferenças nos valores de %rP entre o grupo PTI e cada um dos outros grupos são estatisticamente significativas e não há diferenças entre os outros grupos. Na PTI primária a percentagem de reticulócitos, avaliada pelo parâmetro %Ret, não tem correlação com a %rP; o MPV (Mean Platelet Volume) está aumentado e o PDW (Platelet Distribution Width) está dentro dos valores normais. Conclusão: O novo parâmetro plaquetar %rP provou ser um parâmetro útil no diagnóstico da PTI primária, porque, para um número de plaquetas semelhante, a %rP é significativamente mais elevada na PTI primária do que na trombocitopenia pós-quimioterapia e não é influenciada pelos reticulócitos presentes na amostra. Embora sejam necessários estudos mais alargados, nomeadamente em doentes que se apresentem com trombocitopenia associada a neoplasias linfoproliferativas, a %rP tem potencial para vir a ser utilizada como teste complementar no diagnóstico diferencial de trombocitopenias, podendo, em alguns casos, vir a substituir o medulograma. De notar ainda que, a avaliar pelo MPV e pelo PDW, na PTI primária as plaquetas têm, uniformemente, um maior volume, o que corresponde ao que é possível observar no esfregaço de sangue periférico. Palavras-chave: Trombocitopenia; PTI primária; Plaquetas reticuladas; CELL-DYN® Sapphire; Citometria de fluxo; CD4K-530.

Immune Thrombocytopenic Purpura (ITP) is an immune condition due to the presence of self-reactive antibodies against platelet glycoproteins, causing platelet destruction in the reticulo-endothelial system. Diagnosis is performed mainly by bone marrow aspirate, which can distinguish between thrombocytopenia by enhanced peripheral destruction (such as ITP) or thrombocytopenia due to decreased thrombopoietic activity (aplasia or medullar invasion by abnormal cell proliferation). Reticulated platelets (rP) are large, immature platelets, with residual ribonucleic acid (RNA), recently released from the bone marrow. The hematologic analyzer CELL-DYN® Sapphire allows the determination of reticulated platelets percentage (rP%), using CD4K-530 as a fluorescence marker. Purpose of the study: The main goal of this study is to assess the reliability of rP% in the evaluation of bone marrow thrombopoietic activity, possibly replacing bone marrow aspirate in the diagnosis of primary ITP. Material and methods: Determination of platelet parameters (including rP%) and reticulocyte counts in 139 peripheral blood samples collected in ethylenediaminetetraacetic acid tripotassic (EDTA K3), using CELL-DYN® Sapphire haematological analyzer, with flow cytometry technology. The rP% was obtained using optic methodology, with dispersion angles of 7º and 90º, and with fluorescence of CD4K-530, a RNA marker. Samples divided in 4 groups: Primary ITP n=34; chemotherapy-induced thrombocytopenia n=11; auto-immune haemolytic anaemia (AIHA) n=18; and control n=76. Statistical analysis with StatView 5.0 software. Results: Average rP% (± standard deviation) in: Primary ITP group = 6.435 ± 3.584%; chemotherapy-induced thrombocytopenia group =2.649 ± 1.382%; AIHA group = 2.012± 1.130% and control group = 1.632 ± 0.985%. Statistically significant differences between rP% values in ITP group and each one of the other groups. In ITP group, there is no correlation between reticulocyte percentage (evaluated by the parameter Ret%) and rP%; mean platelet volume (MPV) is higher and platelet distribution width (PDW) is in the normal range. Conclusion: The new platelet parameter rP% proved to be an useful tool in primary ITP diagnosis because, for a similar platelet count, rP% is significantly higher in primary ITP than in chemotherapy-induced thrombocytopenia, with no influence of reticulocyte counts. Even though it is necessary to perform more complimentary studies, especially in patients with lymphoproliferative malignancies associated thrombocytopenia, rP% has potential to be used as complimentary test in thrombocytopenia differential diagnosis, replacing bone marrow aspiration in some cases. It is important to note that, regarding MPV and PDW in primary ITP, platelets have higher size, which can be corroborated by the peripheral blood smear observation. Keywords: Thrombocytopenia; Primary Immune Thrombocytopenic Purpura; Reticulated Platelets; CELL-DYN® Sapphire; Flow Cytometry; CD4K 530.